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            細胞凍存方法及目的你了解嗎?
            更新時間:2019-11-04 點擊次數(shù):3280

                培養(yǎng)細胞基本形態(tài)

                培養(yǎng)細胞zui常見的是貼附于平面支持物細胞。在一般光鏡下生存中的細胞是均質(zhì)而透明的,結(jié)構(gòu)不明顯。細胞在生長期常有1-2 個核仁。在細胞機能狀態(tài)不良時,細胞輪廓會增強,反差增大。若胞質(zhì)中時而出現(xiàn)顆粒、脫滴和腔泡等,表明細胞代謝不良。體外培養(yǎng)細胞根據(jù)它們在培養(yǎng)器皿是否能貼附于支持物上生長特征,可分為貼附型生長和懸浮型生長兩大類。貼附型細胞在培養(yǎng)時能貼附在支持物表面生長。如羊水細胞為貼附型細胞,常表現(xiàn)為成纖維型細胞和上皮細胞生長。懸浮型細胞在培養(yǎng)中懸浮生長。

                哺乳動物細胞冷凍保存

                主要目的:

                (1)保存種子細胞,以便隨時取用。這是保存細胞的zui主要目的。

                (2)減少細胞被微生物污染的危險性。

                (3)減少細胞之間交叉污染的危險性。

                (4)減少細胞因傳代培養(yǎng)而引起的遺傳變異和形態(tài)改變。

                (5)避免有限細胞系出現(xiàn)衰老或惡性轉(zhuǎn)化。

                (6) 降低人力和物力。

                冷凍保存細胞的解凍與復(fù)蘇要點:慢凍快融

                (1)快速解凍。凍存細胞從液氮中取出后,應(yīng)立即放入 37℃水浴中,輕輕搖動冷凍管,使其在 1 分鐘內(nèi)全部融化(不要超過 3 分鐘)。

                (2)解凍操作過程動作要輕。由于冷凍保存過的細胞變得非常脆弱,不僅解凍速度要快,而且動作要輕。一般情況下,解凍后的細胞可直接接種到含*生長培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中直接進行培養(yǎng)(1ml 凍存細胞液加入到 25-30ml 新鮮*培養(yǎng)液中),24 小時后再用新鮮*培養(yǎng)替換舊培養(yǎng)液,以去除 DMSO。如果,細胞對冷凍保護劑特別敏感,那么,解凍后的細胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護劑,然后再接種到含*生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。

                特別注意:

                (1)解凍時務(wù)必注意安全,預(yù)防冷凍管爆裂。,要帶手套,用鑷子將細胞冷凍管從液氮中取出,放入 37℃水浴中。切不可直接用手,以免凍傷。

                (2)冷凍管在水浴中解凍時,要將凍存管蓋子擰緊,確定擰緊后再投入水浴鍋中,注意液面不可超過凍存管蓋面,否則,易發(fā)生污染。

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