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            技術文章

            Technical articles
            人T淋巴細胞白血病病毒p19(HTLV p19)試劑盒使用說明書
            更新時間:2023-12-19 點擊次數:1006

                  T淋巴細胞白血病病毒p19HTLV p19試劑盒使用說明書

            本試劑盒僅供研究使用。

            檢測范圍:                                                             48T

            1pg/ml -50 pg/ml

             

            使用目的:

            本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中T淋巴細胞白血病病毒p19HTLV p19)含量。

            實驗原理

            本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本T淋巴細胞白血病病毒p19HTLV p19水平。用純化的T淋巴細胞白血病病毒p19HTLV p19抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入T淋巴細胞白血病病毒p19HTLV p19),再與HRP標記的T淋巴細胞白血病病毒p19HTLV p19)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過che底洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的T淋巴細胞白血病病毒p19HTLV p19呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人T淋巴細胞白血病病毒p19HTLV p19濃度。

            試劑盒組成

            1

            20倍濃縮洗滌液

            20ml×1

            7

            終止液

            3ml×1

            2

            酶標試劑

            3ml×1

            8

            標準品(80 pg/ml

            0.5ml×1

            3

            標包被

            12孔×4

            9

            標準品稀釋液

            1.5ml×1

            4

            樣品稀釋液

            3ml×1

            10

            說明書

            1

            5

            顯色劑A

            3ml×1

            11

            封板膜

            2 

            6

            顯色劑B

            3ml×1/

            12

            密封袋

            1

            標本要求 

            1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

            2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

            操作步驟

            1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

            40 pg/ml

            5號標準品

            150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

            20 pg/ml

            4號標準品

            150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

            10 pg/ml

            3號標準品

            150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

            5 pg/ml

            2號標準品

            150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

            2.5 pg/ml

            1號標準品

            150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

             

             

            2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻

            3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

            4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

            5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

            6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

            7. 溫育:操作同3。

            8. 洗滌:操作同5。

            9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

            10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

            11. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

            注意事項

            1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

            2濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

            3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

            4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

            5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

            6.底物請避光保存。

            7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

            8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

            9.本試劑不同批號組分不得混用。

            保存條件及有效期

            1試劑盒保存:;2-8。

            2.有效期:6個月

             


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