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            技術文章

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            小鼠回腸炎抗體(PPE Ab)ELISA實驗說明
            更新時間:2025-05-21 點擊次數(shù):179

            檢測范圍                                                          

            2.8pg/ml-200pg/ml 


            使用目的

            本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中回腸炎抗體(PPE Ab)含量。


            實驗原理

            本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中小鼠回腸炎抗體(PPE Ab)水平。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被的微孔中依次加入回腸炎抗體(PPE Ab),再與HRP標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的回腸炎抗體(PPE Ab)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠回腸炎抗體(PPE Ab)濃度。


            標本要求 

            1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

            2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


            操作步驟

            1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

            180pg/ml

            5號標準品

            150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

            90pg/ml

            4號標準品

            150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

            45pg/ml

            3號標準品

            150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

            22.5pg/ml

            2號標準品

            150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

            11.25pg/ml

            1號標準品

            150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

             

            2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

            3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

            4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

            5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

            6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

            7. 溫育:操作同3。

            8. 洗滌:操作同5。

            9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

            10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

            11. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。


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