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            技術文章

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            人2,3-二磷酸甘油酸ELISA試劑盒分析說明
            更新時間:2012-08-27 點擊次數:1738

            2,3-二磷酸甘油酸酶聯(lián)免疫分析

            試劑盒使用說明書

            本試劑盒僅供研究使用。

            檢測范圍:                                                          96T

            150 nmol/L -4000 nmol/L

            使用目的:

            本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)含量。

            實驗原理

            本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)水平。用純化的2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG),再與HRP標記的2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)濃度。 

            試劑盒組成 

            1

            30倍濃縮洗滌液

            20ml×1

            7

            終止液

            6ml×1

            2

            酶標試劑

            6ml×1

            8

            標準品(8000 nmol/L

            0.5ml×1

            3

            標包被

            12孔×8

            9

            標準品稀釋液

            1.5ml×1

            4

            樣品稀釋液

            6ml×1

            10

            說明書

            1

            5

            顯色劑A

            6ml×1

            11

            封板膜

            2張  

            6

            顯色劑B

            6ml×1/

            12

            密封袋

            1

            標本要求 

            1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融

            2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

            操作步驟

            1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

            4000 nmol/L

            5號標準品

            150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

            2000 nmol/L

            4號標準品

            150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

            1000 nmol/L

            3號標準品

            150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

            500 nmol/L

            2號標準品

            150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

            250 nmol/L

            1號標準品

            150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液

            2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

            3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

            4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

            5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

            6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 

            7. 溫育:操作同3。

            8. 洗滌:操作同5。

            9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

            10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

            11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

            操作程序總結:

            計算

              以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 

            注意事項

            1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

            2濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

            3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

            4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

            5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

            6.底物請避光保存。

            7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

            8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

            9.本試劑不同批號組分不得混用。

            10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

            保存條件及有效期

            1試劑盒保存:;2-8。

            2.有效期:6個月

            版權所有 © 上海恒遠生物科技有限公司 備案號:滬ICP備11004148號-3 技術支持:化工儀器網 管理登陸 sitemap.xml

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