ELISA法實(shí)驗(yàn)現(xiàn)已普遍運(yùn)用于科研領(lǐng)域，其實(shí)驗(yàn)原理：用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗C3抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，計(jì)算樣品濃度。
當(dāng)我們將實(shí)驗(yàn)的一切都準(zhǔn)備好并且即將完畢時(shí)，要如何去判定ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果呢？這里給您總結(jié)出了三個(gè)方法，分別是定量測(cè)定、半定量測(cè)定、定性測(cè)定，下面就來(lái)看看吧。
1、定量測(cè)定：用己知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定，與待測(cè)標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或活性單位表示之。
2、半定量測(cè)定：結(jié)果一般以滴度表示。將標(biāo)本連續(xù)稀釋后，進(jìn)行ELISA檢測(cè)，在陽(yáng)性臨界值以上的zui高稀釋度即為該標(biāo)本的“滴度”。
3、定性測(cè)定
（1）陽(yáng)性判定值法(cut-off value，CO值)：一般為陰性對(duì)照的平均A值加一個(gè)常數(shù)，試劑制備嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化，要先計(jì)算出陽(yáng)性對(duì)照A值平均數(shù)和陰性對(duì)照A值平均數(shù)。標(biāo)本A值≥CO值即為陽(yáng)性。
（2）抑制率法：在競(jìng)爭(zhēng)抑制法中+結(jié)果可用抑制率表示。抑制率(％)＝(A陰性對(duì)照A- A待測(cè))／陰性對(duì)照X100％，一般以抑制率≥50％為陽(yáng)性。
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