法測(cè)定蛋白濃度試劑盒
更新時(shí)間：2013-08-14 點(diǎn)擊次數(shù)：1035
一．微量法檢測(cè)：（利用酶標(biāo)儀進(jìn)行定量分析）
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將標(biāo)準(zhǔn)品工作液按0，5，10，15，20，25μl加入到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，不足25μl用水補(bǔ)足到25μl/孔。其它孔加入適當(dāng)體積樣品，不足25μl加水補(bǔ)足到25μl。
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根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積試劑A加1體積試劑B（50：1）充分混勻，配置成適量Lowry工作液。Lowry試劑工作液室溫2小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
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各孔加入Lowry試劑工作液125μl，振蕩混勻，室溫放置10分鐘。
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向各孔加入試劑C12.5μl，立即混勻，室溫放置30分鐘。
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測(cè)定A500nm、A590nm、A650nm或A750nm，500-750nm之間的波長(zhǎng)都可以接受。
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根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣品的蛋白濃度。
常規(guī)法檢測(cè)：
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取7支試管，在前6管分別加入標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)（250μg/ml）溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml，第7管加入1ml待測(cè)樣品液，用雙蒸水分別將每管的體積補(bǔ)充到1ml。
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向每管加入Lowry試劑工作液5ml混合，室溫下放置10分鐘后。
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向每管加入試劑C 0.5ml，每加一管立即混勻，室溫放置30分鐘。
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用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)650nm處，以第1管（不含蛋白質(zhì)）對(duì)照調(diào)零，分別測(cè)定每管的光密度值。
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以每管的光密度值為縱坐標(biāo)，每管的蛋白質(zhì)量為橫坐標(biāo)作圖，然后根據(jù)待測(cè)樣品管的光密度值在坐標(biāo)上查得其蛋白質(zhì)含量。
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